內容簡介

本書作為冷泉港實驗室出版社的經典酵母實驗教程的第二版,收錄了酵母研究中最常用的減數分裂作圖、轉化、基因轉換等11個實驗,以及酵母蛋白抽提、活體染色、RNA分離等28種技術方法。文字簡潔明了,內容全面而詳細,兼顧經典和前沿,是該領域的權威之作。

適合於大學院校、科研單位的教師、學生及研究人員作為實驗指導書,亦可供從事酵母相關生物制品行業的科技人員參考。
 

目錄

譯者序
原著序
前言
遺傳學命名法
實驗篇
實驗一 酵母細胞的觀察
實驗二 營養缺陷型、溫度敏感型和滲透壓敏感型突變株的分離和鑒別
實驗三 減數分裂作圖
實驗四 有絲分裂重組和隨機孢子分析
實驗五 酵母轉化
實驗六 合成致死突變體
實驗七 基因置換
實驗八 ras2抑制基因的分離
實驗九 細胞型操作
實驗十 用插入誘變法分離突變體
實驗十一 利用雙雜交差異互作篩選以分離功能突變體
技術和方案篇
技術和方案1 酵母的高效轉化
技術和方案2 快速粗放的酵母菌落質粒轉化法
技術和方案3 酵母DNA分離
技術和方案4 酵母蛋白質的抽提
技術和方案5 TAP純化方法
技術和方案6 酵母RNA的分離
技術和方案7 質粒DNA的羥胺突變
技術和方案8 酵母β-半乳糖 酶的測定
技術和方案9 羧 酶Y的平板鑒定
技術和方案10 隨機孢子分析
技術和方案11 酵母活細胞染色
技術和方案12 酵母免疫熒光法
技術和方案13 已固定細胞的肌動蛋白染色
技術和方案14 PCR介導基因破壞法
技術和方案15 酵母菌落PCR
技術和方案16 分光光度法測酵母細胞密度
技術和方案17 細胞同步化
技術和方案18 染色質免疫沉淀
技術和方案19 酵母DNA流式細胞記數
技術和方案20 對數生長
技術和方案21 EMS誘變
技術和方案22 四分體解剖
技術和方案23 制備四分體解剖針
技術和方案24 挑取合子
技術和方案25 測定鋪板效率
技術和方案26 小量提取E.coli DNA
技術和方案27 E.coli感受態的制備與轉化
技術和方案28 系統缺失菌株的保存及操作
附錄A 培養基
附錄B 菌株保存
附錄C 酵母遺傳圖譜和物理圖譜
附錄D 平板划線模板
附錄E 菌株核型分析電泳的Southern印跡作圖
附錄F 菌株
附錄G 用標准血球計數板進行酵母細胞計數
附錄H 四分孢子計分表
 

酵母菌是一種單細胞真核生物。它既有一切真核細胞生命活動最基本的重要特征,又有實驗微生物所具備的背景清楚、生長迅速、易於操作等許多優點。現今遺傳學、生物化學和細胞生物學中的許多規律性認識都是以酵母為研究材料得出的。酵母菌是世界上首個被測出基因組DNA全序列的真核生物,在其6607個可讀框(ORF)中已有4752個得到了證實,其中許多是與細胞基本生命活動密切相關的重要基因,在結構與功能方面與高等真核生物有很強的進化保守性。至今已發現有約300種蛋白質在人與酵母中是同等功能的,其中許多與人類疾病相關蛋白是類似的。因此,以酵母為模型研究高等真核生物的重要生理功能和疾病發生發展的分子機理,以及尋找藥物作用靶點等都有其獨特的優勢。此外,基於酵母菌研究的模式生物技術(如基因敲除、基因功能補償和酵母雙雜交技術等)在生命科學的研究中,尤其是在後基因組時代對基因功能的研究中,得到了廣泛的應用。隨著當代生命科學的發展,酵母菌作為一種模式生物的實用性和高效性在科研實踐中得到了充分體現。

美國冷泉港實驗室(Cold Spring Harbor Laboratory)被稱為世界生命科學的聖地與分子生物學的搖籃,為全球影響最大的十大研究機構之一;同時,冷泉港實驗室還是國際生命科學的會議中心與培訓基地,經過這里培訓的優秀科學家如今已遍布全球各地。《酵母遺傳學方法實驗指南》就是冷泉港實驗室組織該領域知名學者合編的一本培訓教程,迄今已有47年的歷史,其問已更新再版多次,以及時適應這個領域的最新進展。本教程最大的特點在於其權威性、全面性和可操作性,它將酵母經典遺傳學和分子生物學實驗的基本原理與操作方法都做了詳盡的介紹。因此,無論對於專業科研人員還是初學者,都是一本不可多得的必備參考書。

參與本書翻譯的人員主要是正在從事酵母遺傳學和分子生物學工作的研究生和博士後,由於譯者的翻譯水平有限,譯文中難免存在錯誤和不妥之處,敬請讀者批評指正。

復旦大學生命科學學院
遺傳工程國家重點實驗室
霍克克
2008年12月
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