醫學微生物學實驗指南

醫學微生物學實驗室生物安全 1
醫學微生物學實驗的目的與要求 5
醫學微生物學實驗室規則 6

第一篇 細菌學實驗
第一章 細菌的染色與形態、結構觀察 9
實驗一 油鏡顯微鏡的使用及細菌形態結構的觀察 9
實驗二 細菌塗片標本的製備及簡單染色法 12
實驗三 細菌的革蘭染色法 15
實驗四 細菌特殊結構（芽胞、莢膜、鞭毛）的染色法 17
實驗五 活菌運動觀察 22
第二章 細菌的培養及其生化代謝產物的檢查 24
實驗六 細菌培養基的製備與滅菌實驗 24
實驗七 細菌的分離接種技術與培養方法 27
實驗八 細菌培養物的性狀觀察 36
實驗九 糖發酵實驗 38
實驗十 蛋白質代謝實驗 41
實驗十一 其他代謝實驗 43
第三章 細菌的遺傳與變異及耐藥性實驗 45
實驗十二 噬菌體裂解細菌實驗 45
實驗十三 細菌的形態變異實驗（L型、H-O變異、S-R變異） 49
實驗十四 細菌的藥物敏感性實驗（紙片法、試管法） 52
實驗十五 細菌耐藥性質粒轉化實驗（化學轉化和電轉化） 56
第四章 動物實驗 60
實驗十六 小鼠腹腔接種方法——金黃色葡萄球菌小鼠腹腔接種方法 60
實驗十七 小鼠屍體解剖與細菌學檢查——金黃色葡萄球菌感染小鼠屍體解剖與細菌學檢查 63
第五章 環境、體表細菌的檢查及消毒與滅菌實驗 66
實驗十八 空氣中細菌的檢測（沉降法） 66
實驗十九 正常人體皮膚及隨身物品細菌的檢查 68
實驗二十 鼻咽腔及口腔中細菌的檢查 71
實驗二十一 消毒與滅菌實驗 72
第六章 病原性球菌 78
實驗二十二 病原性球菌的形態、染色性及培養特性 78
實驗二十三 葡萄球菌血漿凝固酶實驗 80
實驗二十四 抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）實驗——乳膠凝集法 82
實驗二十五 肺炎鏈球菌膽汁溶解實驗 83
實驗二十六 病原性球菌膿汁標本的檢驗 84
第七章 腸道桿菌 87
實驗二十七 糞便標本的檢驗 87
實驗二十八 肥達反應 93
第八章 霍亂弧菌和幽門螺桿菌 95
實驗二十九 霍亂弧菌、副溶血弧菌的檢驗 95
實驗三十 幽門螺桿菌、空腸彎麴菌的檢驗 98
第九章 呼吸道感染細菌的檢驗 101
實驗三十一 結核分枝桿菌的檢驗 101
實驗三十二 白喉棒狀桿菌的檢驗 107
第十章 厭氧性細菌的檢驗 111
實驗三十三 厭氧芽胞梭菌的形態、染色性及培養特性 111
實驗三十四 無芽胞厭氧菌的形態、染色性及培養特性 114
實驗三十五 破傷風外毒素與抗毒素中和實驗 116
實驗三十六 產氣莢膜梭菌動物實驗 117
實驗三十七 臨床標本厭氧菌的分離培養與鑒定 118
第十一章 動物源性細菌的檢驗 123
實驗三十八 炭疽芽胞桿菌的檢驗 123
實驗三十九 布魯菌的檢驗 126
實驗四十 鼠疫耶爾森菌的檢驗 128

第二篇 病毒學實驗
第十二章 病毒的形態學觀察 133
實驗四十一 電子顯微鏡觀察負染病毒 133
實驗四十二 病毒包涵體的檢查 136
第十三章 病毒的分離培養 139
實驗四十三 病毒的組織細胞培養方法 139
實驗四十四 病毒的雞胚培養方法 143
實驗四十五 病毒的動物接種 146
第十四章 病毒的感染性定量測定 148
實驗四十六 病毒組織半數感染量（TCID50）的測定 148
實驗四十七 病毒的空（蝕）斑形成實驗 152
第十五章 病毒抗原的檢測 155
實驗四十八 直接免疫螢光實驗 155
實驗四十九 酶聯免疫吸附實驗——雙抗體夾心法 157
實驗五十 免疫印跡 159
第十六章 病毒抗體的檢測 163
實驗五十一 血凝實驗與血凝抑制實驗 163
實驗五十二 補體結合實驗 166
實驗五十三 酶聯免疫吸附實驗 168
實驗五十四 病毒中和實驗 171
第十七章 病毒核酸的檢測 173
實驗五十五 聚合酶鏈反應定性檢測病毒核酸 173
實驗五十六 螢光定量PCR 檢測病毒核酸 175
實驗五十七 原位雜交法檢測病毒核酸 178

第三篇 真菌學實驗
實驗五十八 真菌的培養及形態觀察 183
實驗五十九 真菌病臨床標本的直接鏡檢與染色觀察 185
實驗六十 真菌DNA快速提取及18SrDNA序列測定鑒定 187

第四篇 其他病原微生物實驗
實驗六十一 支原體的檢驗 193
實驗六十二 衣原體的檢驗 197
實驗六十三 鉤端螺旋體的檢驗 201
實驗六十四 立克次體的檢驗 206
實驗六十五 放線菌的檢驗 209

第五篇 基本分子微生物學技術
實驗六十六 重組質粒構建 215
實驗六十七 外源性蛋白的重組表達 220
實驗六十八 細菌基因敲除技術 231
實驗六十九 轉座子技術 242
實驗七十 螢光定量 PCR 245
實驗七十一 菌群分析 252

附錄
微生物學實驗室常用的試劑 259
一、常用染色液的配製 259
二、常用培養基的製備 259
三、常用試劑和溶液的配製 267
四、洗滌液的配製與使用 271
五、常用消毒液和清潔液的配製法 272
菌種保藏 275
一、傳代培養保藏法 275
二、液體石蠟覆蓋保藏法 275
三、載體保藏法 276
四、懸液保藏法 277
五、寄主保藏法 278
六、冷凍保藏法 278
實驗動物管理 281